मैनबत्ती र साबुन बनाउनको लागि शुद्ध Saposhnikovia divaricata तेल होलसेल डिफ्यूजर आवश्यक तेल रिड बर्नर डिफ्यूजरहरूको लागि नयाँ

छोटो विवरण:

 

२.१। SDE को तयारी

SD को rhizomes Hanherb Co. (Guri, Korea) बाट सुक्खा जडिबुटीको रूपमा खरिद गरिएको थियो। कोरिया इन्स्टिच्युट अफ ओरिएन्टल मेडिसिन (KIOM) का डा गो-या चोईले बिरुवाको सामग्री वर्गीकरण रूपमा पुष्टि गरेका थिए। एउटा भाउचर नमूना (नम्बर 2014 SDE-6) कोरियन हर्बेरियम को मानक हर्बल रिसोर्समा जम्मा गरिएको थियो। SD (320 ग्राम) को सुकेको rhizomes 70% इथेनोल (2 h रिफ्लक्स संग) संग दुई पटक निकालिएको थियो र निकासी पछि कम दबाब मा केन्द्रित गरियो। डिकोक्शन फिल्टर गरिएको थियो, लियोफिलाइज गरिएको थियो, र 4 डिग्री सेल्सियसमा भण्डार गरिएको थियो। कच्चा प्रारम्भिक सामग्रीबाट सुकेको निकासीको उपज 48.13% (w/w) थियो।

 

२.२। मात्रात्मक उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (HPLC) विश्लेषण

क्रोमेटोग्राफिक विश्लेषण HPLC प्रणाली (वाटर कं, मिलफोर्ड, एमए, संयुक्त राज्य अमेरिका) र फोटोडियोड एरे डिटेक्टरको साथ प्रदर्शन गरिएको थियो। SDE को HPLC विश्लेषणको लागि, प्रिम-O-glucosylcimifugin मानक कोरिया प्रमोशन इन्स्टिच्युट फर ट्रेडिशनल मेडिसिन उद्योग (Gyeongsan, Korea) बाट खरिद गरिएको थियो, रसेकेन्ड-ओ-ग्लुकोसिलहमाउडोल र ४′-O-β-डी-ग्लुकोसिल-5-O-मेथाइलविसामिनोललाई हाम्रो प्रयोगशाला भित्र पृथक गरिएको थियो र स्पेक्ट्रल विश्लेषणहरू द्वारा पहिचान गरिएको थियो, मुख्य रूपमा NMR र MS द्वारा।

SDE नमूनाहरू (0.1 मिलीग्राम) 70% इथेनॉल (10 एमएल) मा भंग गरियो। क्रोमेटोग्राफिक पृथक्करण XSelect HSS T3 C18 स्तम्भ (4.6 × 250 mm, 5) सँग प्रदर्शन गरिएको थियो।μm, वाटर्स कं, मिलफोर्ड, MA, USA)। मोबाइल चरणमा एसिटोनिट्रिल (ए) र पानीमा ०.१% एसिटिक एसिड (बी) १.० एमएल/मिनेटको प्रवाह दरमा समावेश थियो। एक बहु-चरण ढाँचा कार्यक्रम निम्न रूपमा प्रयोग गरिएको थियो: 5% A (0 मिनेट), 5-20% A (0-10 मिनेट), 20% A (10-23 मिनेट), र 20-65% A (23-40 मिनेट) )। पत्ता लगाउने तरंगदैर्ध्य 210-400 nm मा स्क्यान गरियो र 254 nm मा रेकर्ड गरियो। इंजेक्शन मात्रा 10.0 थियोμL. तीन क्रोमोनहरूको निर्धारणको लागि मानक समाधानहरू 7.781 mg/mL (प्राइम-O-glucosylcimifugin), 31.125 mg/mL (4′-O-β-डी-ग्लुकोसिल-5-O-मेथाइलविसामिनोल), र 31.125 मिलीग्राम/एमएल (सेकेन्ड-ओ- ग्लुकोसिलहमाउडोल) मेथानोलमा र 4 डिग्री सेल्सियसमा राखिएको छ।

२.३ विरोधी भडकाऊ गतिविधि को मूल्याङ्कनVitro मा

२.३.१। सेल संस्कृति र नमूना उपचार

RAW 264.7 कोशिकाहरू अमेरिकी प्रकार संस्कृति संग्रह (ATCC, Manassas, VA, USA) बाट प्राप्त गरिएको थियो र 1% एन्टिबायोटिक्स र 5.5% FBS भएको DMEM माध्यममा हुर्कियो। कोशिकाहरू 5% CO2 को आर्द्र वातावरणमा 37 डिग्री सेल्सियसमा इन्क्युबेटेड थिए। कोशिकाहरूलाई उत्तेजित गर्न, माध्यमलाई 1 मा ताजा DMEM माध्यम, र lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) द्वारा प्रतिस्थापित गरियो।μg/mL SDE (200 वा 400) को उपस्थिति वा अनुपस्थितिमा थपिएको थियोμg/mL) थप २४ घण्टाको लागि।

२.३.२। नाइट्रिक अक्साइड (NO), प्रोस्टाग्ल्यान्डिन E2 (PGE2), ट्यूमर नेक्रोसिस कारक को निर्धारण-α(TNF-α), र Interleukin-6 (IL-6) उत्पादन

कक्षहरूलाई SDE बाट उपचार गरियो र LPS सँग २४ घण्टाको लागि उत्तेजित गरियो। अघिल्लो अध्ययन अनुसार ग्रीस अभिकर्मक प्रयोग गरेर नाइट्राइट मापन गरेर कुनै उत्पादनको विश्लेषण गरिएको थिएन।12]। सूजन साइटोकिन्स PGE2, TNF- का स्रावα, र IL-6 निर्माताको निर्देशन अनुसार ELISA किट (R&D प्रणाली) प्रयोग गरेर निर्धारण गरिएको थियो। NO र साइटोकाइन उत्पादनमा SDE को प्रभावहरू Wallac EnVision प्रयोग गरेर 540 nm वा 450 nm मा निर्धारण गरिएको थियो।™माइक्रोप्लेट रिडर (PerkinElmer)।

२.४ Antiosteoarthritis गतिविधि को मूल्यांकनVivo मा

२.४.१। जनावरहरू

Sprague-Dawley मुसा (7 हप्ता पुरानो) Samtako Inc. (Osan, Korea) बाट खरिद गरिएको थियो र 12-घण्टा उज्यालो/अँध्यारो चक्रको साथ नियन्त्रित अवस्थामा राखिएको थियो।डिग्री सेल्सियस र% आर्द्रता। मुसालाई प्रयोगशाला आहार र पानी प्रदान गरिएको थियोविज्ञापन लिबिटम। सबै प्रयोगात्मक प्रक्रियाहरू स्वास्थ्यको राष्ट्रिय संस्थान (NIH) दिशानिर्देशहरूको अनुपालनमा प्रदर्शन गरिएको थियो र Daejeon विश्वविद्यालय (Daejeon, गणतन्त्र कोरिया) को पशु हेरचाह र प्रयोग समिति द्वारा अनुमोदित गरिएको थियो।

२.४.२। मुसामा MIA सँग OA को इन्डक्शन

अध्ययनको प्रारम्भ अघि जनावरहरूलाई अनियमित र उपचार समूहहरूमा तोकिएको थियो (प्रति समूह)। MIA समाधान (3 mg/50μ०.९% सलाइनको एल) केटामाइन र xylazine को मिश्रणको साथ प्रेरित एनेस्थेसिया अन्तर्गत दाहिने घुँडाको इन्ट्रा-आर्टिक्युलर स्पेसमा सिधै इंजेक्शन गरिएको थियो। मुसालाई अनियमित रूपमा चार समूहमा विभाजन गरिएको थियो: (१) एमआईए इंजेक्शन नभएको सलाइन समूह, (२) एमआईए इंजेक्शन भएको एमआईए समूह, (३) एसडीई-उपचार गरिएको समूह (२०० मिलीग्राम/किग्रा) एमआईए इंजेक्शनसहित, र (४) ) indomethacin- (IM-) उपचार गरिएको समूह (2 mg/kg) MIA इंजेक्शन संग। मुसाहरूलाई SDE र IM सँग मौखिक रूपमा प्रशासित गरिएको थियो 1 हप्ता पहिले MIA इंजेक्शन 4 हप्ताको लागि। यस अध्ययनमा प्रयोग गरिएको SDE र IM को खुराक अघिल्लो अध्ययनहरूमा कार्यरत व्यक्तिहरूमा आधारित थियो।10,13,14].

२.४.३। Hindpaw वजन-असर वितरण को मापन

OA इन्डक्शन पछि, हिन्डपाउको वजन-असर क्षमतामा मूल सन्तुलन बाधित भयो। एक असक्षमता परीक्षक (लिन्टन इन्स्ट्रुमेन्टेशन, नोर्फोक, यूके) वजन-असर सहिष्णुतामा परिवर्तनहरू मूल्याङ्कन गर्न प्रयोग गरिएको थियो। मुसाहरू सावधानीपूर्वक मापन कक्षमा राखिएको थियो। पछाडिको अंगले लगाएको तौल बोक्ने बल 3 सेकेन्डको अवधिमा औसत गरिएको थियो। तौल वितरण अनुपात निम्न समीकरणद्वारा गणना गरिएको थियो: [दायाँ पछाडिको अंगमा तौल/(दायाँ पछाडिको अंगमा तौल + बायाँ पछाडिको अंगमा तौल)] × 100 [15].

२.४.४। सीरम साइटोकाइन स्तरहरूको मापन

रगत नमूनाहरू 1,500 ग्राम मा 10 मिनेटको लागि 4 डिग्री सेल्सियसमा सेन्ट्रीफ्यूज गरियो; त्यसपछि सीरम सङ्कलन गरियो र प्रयोग नभएसम्म −70°C मा भण्डारण गरियो। IL-1 को स्तरβ, IL-6, TNF-α, र सीरममा PGE2 R&D प्रणालीहरू (Minneapolis, MN, USA) बाट ELISA किटहरू प्रयोग गरेर निर्माता निर्देशनहरू अनुसार मापन गरियो।

2.4.5। वास्तविक-समय मात्रात्मक RT-PCR विश्लेषण

कुल आरएनए TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) को प्रयोग गरेर घुँडाको जोर्नी टिस्युबाट निकालिएको थियो, CDNA मा रिभर्स ट्रान्सक्राइब गरिएको थियो र PCR-एम्प्लीफाइड SYBR हरियो (Applied Biosystems) को साथ TM One Step RT PCR किट प्रयोग गरेर। , Grand Island, NY, USA)। वास्तविक-समय मात्रात्मक PCR एप्लाइड बायोसिस्टम 7500 वास्तविक-समय PCR प्रणाली (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, ग्रान्ड आइल्याण्ड, NY, USA) को प्रयोग गरेर प्रदर्शन गरिएको थियो। प्राइमर अनुक्रम र प्रोब-क्रम तालिकामा देखाइएको छ1। नमूना cDNAs को Aliquots र GAPDH cDNA को बराबर मात्रामा TaqMan® युनिभर्सल PCR मास्टर मिश्रण DNA पोलिमरेज भएको निर्माताको निर्देशन अनुसार विस्तार गरिएको थियो (एप्लाइड बायोसिस्टम, फोस्टर, CA, USA)। PCR अवस्थाहरू 50 ° C मा 2 मिनेट, 94 ° C मा 10 मिनेट, 95 ° C मा 15 s, र 40 चक्रहरूको लागि 60 ° C मा 1 मिनेट थियो। लक्ष्य जीनको एकाग्रता तुलनात्मक Ct (प्रवर्द्धन प्लट र थ्रेसहोल्ड बीचको क्रस-पोइन्टमा थ्रेसहोल्ड साइकल नम्बर) विधि प्रयोग गरेर निर्धारण गरिएको थियो, निर्माता निर्देशनहरू अनुसार।

एफओबी मूल्य:US $0.5 - 9,999 / टुक्रा

न्यूनतम अर्डर मात्रा:100 टुक्रा/टुक्रा

आपूर्ति क्षमता:10000 टुक्रा/टुक्रा प्रति महिना