मैनबत्ती र साबुन बनाउनको लागि शुद्ध सपोश्निकोभिया डिभारिकाटा तेल थोक डिफ्यूजर आवश्यक तेल रिड बर्नर डिफ्यूजरहरूको लागि नयाँ

छोटो विवरण:

 

२.१. SDE को तयारी

SD का राइजोमहरू हानहर्ब कम्पनी (गुरी, कोरिया) बाट सुकेको जडीबुटीको रूपमा खरिद गरिएको थियो। कोरिया इन्स्टिच्युट अफ ओरिएन्टल मेडिसिन (KIOM) का डा. गो-या चोईले वनस्पति सामग्रीहरूलाई वर्गीकरणको रूपमा पुष्टि गरेका थिए। एक भौचर नमूना (नम्बर २०१४ SDE-६) कोरियाली हर्बेरियम अफ स्ट्यान्डर्ड हर्बल रिसोर्सेसमा जम्मा गरिएको थियो। SD (३२० ग्राम) को सुकेको राइजोमहरू ७०% इथेनॉल (२ घण्टा रिफ्लक्सको साथ) दुई पटक निकालिएको थियो र त्यसपछि निकासीलाई कम दबाबमा केन्द्रित गरिएको थियो। डिकोक्शनलाई फिल्टर गरिएको थियो, लियोफिलाइज गरिएको थियो र ४°C मा भण्डारण गरिएको थियो। कच्चा सुरु गर्ने सामग्रीबाट सुकेको निकासीको उत्पादन ४८.१३% (w/w) थियो।

 

२.२. मात्रात्मक उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफी (HPLC) विश्लेषण

क्रोमेटोग्राफिक विश्लेषण HPLC प्रणाली (वाटर्स कं, मिलफोर्ड, एमए, संयुक्त राज्य अमेरिका) र फोटोडायोड एरे डिटेक्टरको साथ गरिएको थियो। SDE को HPLC विश्लेषणको लागि, प्राइम-O-ग्लुकोसिलसिमिफुजिन मानक कोरिया प्रमोशन इन्स्टिच्युट फर ट्रेडिशनल मेडिसिन इन्डस्ट्री (ग्योङसान, कोरिया) बाट खरिद गरिएको थियो, रसेकेन्ड-ओ-ग्लुकोसिलहामाउडोल र ४′-O-β-डी-ग्लुकोसिल-५-O-मिथाइलभिसामिनोललाई हाम्रो प्रयोगशाला भित्र पृथक गरिएको थियो र वर्णक्रमीय विश्लेषणहरूद्वारा पहिचान गरिएको थियो, मुख्यतया NMR र MS द्वारा।

SDE नमूनाहरू (०.१ मिलीग्राम) ७०% इथेनॉल (१० मिलीलीटर) मा घुलाइएको थियो। क्रोमेटोग्राफिक पृथकीकरण XSelect HSS T3 C18 स्तम्भ (४.६ × २५० मिमी, ५) को साथ गरिएको थियो।μm, वाटर्स कं, मिलफोर्ड, एमए, संयुक्त राज्य अमेरिका)। मोबाइल चरणमा १.० एमएल/मिनेटको प्रवाह दरमा पानी (B) मा एसिटोनिट्राइल (A) र ०.१% एसिटिक एसिड समावेश थियो। एक बहु-चरण ग्रेडियन्ट कार्यक्रम निम्नानुसार प्रयोग गरिएको थियो: ५% A (० मिनेट), ५-२०% A (०-१० मिनेट), २०% A (१०-२३ मिनेट), र २०-६५% A (२३-४० मिनेट)। पत्ता लगाउने तरंगदैर्ध्य २१०-४०० एनएममा स्क्यान गरिएको थियो र २५४ एनएममा रेकर्ड गरिएको थियो। इंजेक्शन भोल्युम १०.० थियो।μL. तीन क्रोमोनको निर्धारणको लागि मानक समाधानहरू ७.७८१ मिलीग्राम/एमएलको अन्तिम सांद्रतामा तयार पारिएको थियो (प्राइम-O-ग्लुकोसिलसिमिफ्युगिन), ३१.१२५ मिलीग्राम/मिली (४′-O-β-डी-ग्लुकोसिल-५-O-मिथाइलभिसामिनोल), र ३१.१२५ मिलीग्राम/मिलीलीटर (सेकेन्ड-ओ-ग्लुकोसिलहामौडोल) मिथेनोलमा मिसाइन्छ र ४ डिग्री सेल्सियसमा राखिन्छ।

२.३. एन्टी-इन्फ्लेमेटरी गतिविधिको मूल्याङ्कनभिट्रोमा

२.३.१. कोष संस्कृति र नमुना उपचार

RAW २६४.७ कोषहरू अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्शन (ATCC, Manassas, VA, USA) बाट प्राप्त गरिएको थियो र १% एन्टिबायोटिक र ५.५% FBS भएको DMEM माध्यममा उब्जाइएको थियो। कोषहरूलाई ३७°C मा ५% CO2 को आर्द्र वातावरणमा इन्क्युबेट गरिएको थियो। कोषहरूलाई उत्तेजित गर्न, माध्यमलाई ताजा DMEM माध्यमले प्रतिस्थापन गरिएको थियो, र १ मा लिपोपोलिसेकेराइड (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) लाई लिइएको थियो।μSDE (२०० वा ४००) को उपस्थिति वा अनुपस्थितिमा g/mL थपिएको थियोμg/mL) थप २४ घण्टाको लागि।

२.३.२. नाइट्रिक अक्साइड (NO), प्रोस्टाग्ल्यान्डिन E2 (PGE2), ट्यूमर नेक्रोसिस कारकको निर्धारण-α(TNF-)α), र इन्टरल्युकिन-६ (IL-६) उत्पादन

कोषहरूलाई SDE ले उपचार गरियो र २४ घण्टाको लागि LPS ले उत्तेजित गरियो। अघिल्लो अध्ययन अनुसार ग्रिस अभिकर्मक प्रयोग गरेर नाइट्राइट मापन गरेर NO उत्पादनको विश्लेषण गरिएको थियो [12]. सूजनकारी साइटोकाइनहरूको स्राव PGE2, TNF-α, र IL-6 निर्माताको निर्देशन अनुसार ELISA किट (R&D प्रणाली) प्रयोग गरेर निर्धारण गरिएको थियो। NO र साइटोकाइन उत्पादनमा SDE को प्रभावहरू Wallac EnVision प्रयोग गरेर 540 nm वा 450 nm मा निर्धारण गरिएको थियो।™माइक्रोप्लेट रिडर (पर्किनएल्मर)।

२.४. अस्थिरोग विरोधी गतिविधिको मूल्याङ्कनभिभोमा

२.४.१. जनावरहरू

भाले स्प्रेग-डाउली मुसा (७ हप्ता पुरानो) सामताको इंक (ओसान, कोरिया) बाट खरिद गरिएको थियो र १२ घण्टाको प्रकाश/अँध्यारो चक्रको साथ नियन्त्रित अवस्थामा राखिएको थियो।°C र% आर्द्रता। मुसाहरूलाई प्रयोगशाला आहार र पानी प्रदान गरिएको थियो।विज्ञापन अनुमतिपत्रसबै प्रयोगात्मक प्रक्रियाहरू राष्ट्रिय स्वास्थ्य संस्थान (NIH) निर्देशिकाहरूको अनुपालनमा गरिएको थियो र डेजियोन विश्वविद्यालय (डेजियोन, कोरिया गणराज्य) को पशु हेरचाह र प्रयोग समिति द्वारा अनुमोदित गरिएको थियो।

२.४.२. मुसाहरूमा MIA सँग OA को प्रेरण

अध्ययन सुरु गर्नु अघि जनावरहरूलाई अनियमित रूपमा उपचार समूहहरूमा तोकिएको थियो (प्रति समूह)। MIA घोल (३ मिलीग्राम/५०)μ०.९% सलाइनको एल) केटामाइन र जाइलाजिनको मिश्रणले प्रेरित एनेस्थेसिया अन्तर्गत दाहिने घुँडाको इन्ट्रा-आर्टिक्युलर स्पेसमा सिधै इन्जेक्सन गरिएको थियो। मुसाहरूलाई अनियमित रूपमा चार समूहमा विभाजन गरिएको थियो: (१) MIA इंजेक्शन बिना सलाइन समूह, (२) MIA इंजेक्शनको साथ MIA समूह, (३) MIA इंजेक्शनको साथ SDE-उपचार गरिएको समूह (२०० मिलीग्राम/किग्रा), र (४) MIA इंजेक्शनको साथ इन्डोमेथासिन- (IM-) उपचार गरिएको समूह (२ मिलीग्राम/किग्रा)। मुसाहरूलाई MIA इंजेक्शनको १ हप्ता अघि ४ हप्तासम्म SDE र IM मौखिक रूपमा दिइयो। यस अध्ययनमा प्रयोग गरिएको SDE र IM को खुराक अघिल्ला अध्ययनहरूमा कार्यरतहरूमा आधारित थियो [10,13,14].

२.४.३. हिन्डपा तौल-वाहक वितरणको मापन

OA इन्डक्सन पछि, पछाडिको खुट्टाको तौल वहन क्षमतामा मूल सन्तुलन बिग्रियो। तौल वहन सहनशीलतामा परिवर्तनहरूको मूल्याङ्कन गर्न एक अक्षमता परीक्षक (लिन्टन उपकरण, नोर्फोक, बेलायत) प्रयोग गरिएको थियो। मुसाहरूलाई सावधानीपूर्वक मापन कक्षमा राखिएको थियो। पछाडिको खुट्टाले प्रयोग गरेको तौल वहन बलको औसत ३ सेकेन्डको अवधिमा निकालिएको थियो। तौल वितरण अनुपात निम्न समीकरणद्वारा गणना गरिएको थियो: [दायाँ पछाडिको खुट्टामा तौल/(दायाँ पछाडिको खुट्टामा तौल + बायाँ पछाडिको खुट्टामा तौल)] × १०० [15].

२.४.४. रगतमा साइटोकाइनको स्तरको मापन

रगतका नमूनाहरूलाई ४°C मा १० मिनेटको लागि १,५०० ग्राममा सेन्ट्रीफ्यूज गरिएको थियो; त्यसपछि सीरम सङ्कलन गरिएको थियो र प्रयोग नभएसम्म −७०°C मा भण्डारण गरिएको थियो। IL-1 को स्तरहरूβ, IL-6, TNF-α, र सीरममा PGE2 निर्माताको निर्देशन अनुसार R&D प्रणाली (मिनियापोलिस, MN, USA) बाट ELISA किटहरू प्रयोग गरेर मापन गरिएको थियो।

२.४.५। वास्तविक-समय मात्रात्मक RT-PCR विश्लेषण

TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) प्रयोग गरेर घुँडाको जोर्नीको तन्तुबाट कुल RNA निकालिएको थियो, cDNA मा उल्टो ट्रान्सक्राइब गरिएको थियो र SYBR हरियो (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) भएको TM One Step RT PCR किट प्रयोग गरेर PCR-एम्प्लीफाइड गरिएको थियो। Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR प्रणाली (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) प्रयोग गरेर वास्तविक-समय मात्रात्मक PCR प्रदर्शन गरिएको थियो। प्राइमर अनुक्रम र प्रोब-अनुक्रम तालिकामा देखाइएको छ।1। निर्माताको निर्देशन अनुसार (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, फोस्टर, CA, USA) DNA पोलिमरेज भएको TaqMan® युनिभर्सल PCR मास्टर मिश्रणले नमूना cDNA को एकमुष्ट मात्रा र GAPDH cDNA को समान मात्रा प्रवर्द्धन गरिएको थियो। PCR अवस्थाहरू ५०°C मा २ मिनेट, ९४°C मा १० मिनेट, ९५°C मा १५ सेकेन्ड र ६०°C मा १ मिनेट ४० चक्रको लागि थिए। निर्माताको निर्देशन अनुसार, तुलनात्मक Ct (एम्प्लीफिकेशन प्लट र थ्रेसहोल्ड बीचको क्रस-पोइन्टमा थ्रेसहोल्ड चक्र नम्बर) विधि प्रयोग गरेर लक्ष्य जीनको सांद्रता निर्धारण गरिएको थियो।

एफओबी मूल्य:US $०.५ - ९,९९९ / टुक्रा

न्यूनतम अर्डर मात्रा:१०० टुक्रा/टुक्रा

आपूर्ति क्षमता:प्रति महिना १०००० टुक्रा/टुक्रा