ओस्टियोआर्थराइटिस (OA) दीर्घकालीन पुरानो हड्डी जोर्नी रोगहरु मध्ये एक हो जसले 65 वर्ष भन्दा माथिको जनसंख्यालाई असर गर्छ।
1]। सामान्यतया, OA रोगीहरूलाई क्षतिग्रस्त कार्टिलेज, सूजन भएको सिनोभियम, र क्षय भएको कोन्ड्रोसाइट्सको निदान गरिन्छ, जसले दुखाइ र शारीरिक कष्टलाई ट्रिगर गर्दछ।
2]। गठिया दुखाइ मुख्यतया जोर्नीहरूमा सूजनको कारण कार्टिलेजको क्षयको कारणले हुन्छ, र कार्टिलेजलाई गम्भीर रूपमा क्षतिग्रस्त हुँदा हड्डीहरू एकअर्कासँग ठोक्किएर असहनीय पीडा र शारीरिक कठिनाइहरू निम्त्याउन सक्छ।
3]। दुखाइ, सूजन, र संयुक्त को कठोरता जस्ता लक्षणहरु संग भडकाऊ मध्यस्थहरु को संलग्नता राम्रो संग दस्तावेज गरिएको छ। OA बिरामीहरूमा, इन्फ्लेमेटरी साइटोकाइनहरू, जसले कार्टिलेज र सबकोन्ड्रल हड्डीको क्षय निम्त्याउँछ, सायनोभियल फ्लुइडमा पाइन्छ।
4]। दुई प्रमुख उजुरीहरू जुन OA बिरामीहरूलाई सामान्यतया हुन्छ दुखाइ र सिनोभियल सूजन। त्यसैले हालको OA थेरापीहरूको प्राथमिक लक्ष्य दुखाइ र सूजन कम गर्न हो। [
5]। यद्यपि उपलब्ध OA उपचारहरू, गैर-स्टेरोइडल र स्टेरोइडल औषधिहरू सहित, दुखाइ र सूजन कम गर्न प्रभावकारिताहरू साबित भएका छन्, यी औषधिहरूको दीर्घकालीन प्रयोगले हृदय, ग्यास्ट्रो-इंटेस्टाइनल, र मृगौला रोगहरू जस्ता गम्भीर स्वास्थ्य परिणामहरू छन्।
6]। तसर्थ, ओस्टियोआर्थराइटिसको उपचारको लागि कम साइड इफेक्ट भएको अझ प्रभावकारी औषधिको विकास गर्नुपर्छ।
प्राकृतिक स्वास्थ्य उत्पादनहरू सुरक्षित र सजीलो उपलब्ध हुनको लागि बढ्दो लोकप्रिय छन्।
7]। परम्परागत कोरियाली औषधिहरूले गठिया सहित धेरै भडकाऊ रोगहरू विरुद्ध प्रभावकारी साबित भएका छन्।
8]। अकल्यान्डिया लाप्पा डीसी। यसको औषधीय गुणहरूका लागि परिचित छ, जस्तै दुखाइ कम गर्न र पेटलाई शान्त पार्न क्यूईको परिसंचरण बढाउन, र परम्परागत रूपमा प्राकृतिक एनाल्जेसिकको रूपमा प्रयोग गरिएको छ।
9]। अघिल्लो रिपोर्टहरूले सुझाव दिन्छ कि A. lappa सँग एन्टि-इन्फ्लेमेटरी छ।
10,
11], दर्दनाक [
12, क्यान्सर प्रतिरोधी [
13], र ग्यास्ट्रोप्रोटेक्टिभ [
14] प्रभावहरू। A. lappa को विभिन्न जैविक गतिविधिहरु यसको प्रमुख सक्रिय यौगिकहरु को कारण हो: costunolide, dehydrocostus lactone, dihydrocostunolide, costuslactone, α-costol, saussurea lactone र costuslactone [
15]। प्रारम्भिक अध्ययनहरूले दावी गरे कि कास्टुनोलाइडले लिपोपोलिसेकराइड (एलपीएस) मा एन्टि-इन्फ्लेमेटरी गुणहरू देखाएको छ, जसले एनएफ-केबी र तातो झटका प्रोटीन मार्गको नियमन मार्फत म्याक्रोफेजहरूलाई प्रेरित गर्यो।
16,
17]। यद्यपि, कुनै पनि अध्ययनले OA उपचारको लागि A. lappa को सम्भावित गतिविधिहरूको अनुसन्धान गरेको छैन। हालको अनुसन्धानले OA विरुद्ध (मोनोसोडियम-आयोडोएसीटेट) MIA र एसिटिक एसिड-प्रेरित रोडेन्ट मोडेलहरू प्रयोग गरेर A. lappa को उपचारात्मक प्रभावहरूको अनुसन्धान गरेको छ।
Monosodium-iodoacetate (MIA) प्रसिद्ध रूपमा धेरै पीडा व्यवहारहरू र जनावरहरूमा OA को pathophysiological विशेषताहरू उत्पादन गर्न प्रयोग गरिन्छ।
18,
19,
20]। घुँडाको जोर्नीमा इन्जेक्सन गर्दा, MIA ले कोन्ड्रोसाइट मेटाबोलिज्मलाई अव्यवस्थित बनाउँछ र सूजन र सूजनका लक्षणहरू उत्पन्न गर्छ, जस्तै कार्टिलेज र सबकोन्ड्रल हड्डीको क्षय, OA का मुख्य लक्षणहरू।
18]। एसिटिक एसिडको साथ प्रेरित राइटिङ प्रतिक्रिया व्यापक रूपमा जनावरहरूमा परिधीय दुखाइको सिमुलेशनको रूपमा मानिन्छ जहाँ भडकाउ दुखाइ मात्रात्मक रूपमा मापन गर्न सकिन्छ।
19]। माउस म्याक्रोफेज सेल लाइन, RAW264.7, लोकप्रिय रूपमा सूजन को लागी सेलुलर प्रतिक्रियाहरु को अध्ययन गर्न को लागी प्रयोग गरिन्छ। LPS को साथ सक्रिय भएपछि, RAW264 म्याक्रोफेजहरूले भडकाऊ मार्गहरू सक्रिय गर्दछ र TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS, र IL-6 जस्ता धेरै सूजन मध्यस्थहरू स्रावित गर्दछ।
20]। यस अध्ययनले MIA पशु मोडेल, एसिटिक एसिड-प्रेरित पशु मोडेल, र LPS-सक्रिय RAW264.7 कोशिकाहरूमा OA विरुद्ध A. lappa को एन्टि-नोसिसेप्टिभ र एन्टि-इन्फ्लेमेटरी प्रभावहरूको मूल्याङ्कन गरेको छ।
2. सामग्री र विधिहरू
२.१। बिरुवा सामाग्री
A. lappa DC को सुकेको जरा। प्रयोगमा प्रयोग गरिएको एप्युलिप फार्मास्यूटिकल कं, लिमिटेड, (सियोल, कोरिया) बाट खरिद गरिएको थियो। यो हर्बल फार्माकोलोजी विभाग, कोरियन मेडिसिन, गाचोन विश्वविद्यालयका कर्नल प्रा. डोङ्गुन ली द्वारा पहिचान गरिएको थियो, र भाउचर नमूना नम्बर 18060301 को रूपमा जम्मा गरिएको थियो।
२.२। A. lappa एक्स्ट्र्याक्ट को HPLC विश्लेषण
A. lappa रिफ्लक्स उपकरण (डिस्टिल्ड पानी, 100 ° C मा 3 घन्टा) प्रयोग गरेर निकालिएको थियो। निकालिएको घोललाई कम-दबाव बाष्पीकरणको प्रयोग गरेर फिल्टर र कन्डेन्स गरिएको थियो। A. लप्पा एक्स्ट्र्याक्टको उपज −80 °C अन्तर्गत फ्रिज-ड्राइङ पछि 44.69% थियो। A. lappa को क्रोमेटोग्राफिक विश्लेषण 1260 InfinityⅡ HPLC-प्रणाली (Agilent, Pal Alto, CA, USA) को प्रयोग गरेर जडान गरिएको HPLC संग गरिएको थियो। क्रोमेटिक विभाजनको लागि, EclipseXDB C18 स्तम्भ (4.6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) 35 °C मा प्रयोग गरिएको थियो। कुल 100 मिलीग्राम नमूना 50% मेथानोलको 10 एमएलमा पातलो गरी 10 मिनेटको लागि सोनिक गरिएको थियो। नमूनाहरू 0.45 μm को सिरिन्ज फिल्टर (वाटर कर्पोरेशन, मिलफोर्ड, एमए, संयुक्त राज्य अमेरिका) को साथ फिल्टर गरिएको थियो। मोबाइल चरण संरचना 0.1% फस्फोरिक एसिड (A) र एसीटोनिट्रिल (B) थियो र स्तम्भ निम्नानुसार एल्युट गरिएको थियो: 0-60 मिनेट, 0%; ६०–६५ मिनेट, १००%; ६५–६७ मिनेट, १००%; 67–72 मिनेट, 0% विलायक B 1.0 mL/min को प्रवाह दरको साथ। 10 μL को एक इंजेक्शन भोल्युम प्रयोग गरेर 210 nm मा फोहोर अवलोकन गरियो। विश्लेषण तीन प्रतियों मा प्रदर्शन गरिएको थियो।
२.३ पशु आवास र व्यवस्थापन
5 हप्ता उमेरका पुरुष Sprague-Dawley (SD) मुसाहरू र 6 हप्ता उमेरका नर ICR मुसाहरू Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea) बाट खरिद गरिएको थियो। जनावरहरूलाई कोठामा स्थिर तापक्रम (22 ± 2 °C) र आर्द्रता (55 ± 10%) र 12/12 घन्टाको उज्यालो/गाढा चक्र प्रयोग गरेर राखिएको थियो। जनावरहरू प्रयोग सुरु हुनु अघि एक हप्ता भन्दा बढीको लागि अवस्थासँग परिचित थिए। जनावरहरूलाई दाना र पानीको विज्ञापन लिबिटम आपूर्ति थियो। Gachon विश्वविद्यालय (GIACUC-R2019003) मा पशु हेरचाह र ह्यान्डलिङको लागि वर्तमान नैतिक नियमहरू सबै पशु प्रयोगात्मक प्रक्रियाहरूमा कडाईका साथ पालना गरियो। अध्ययन अन्वेषक-अन्धो र समानान्तर परीक्षण डिजाइन गरिएको थियो। हामीले एनिमल एक्सपेरिमेन्टल एथिक्स कमिटीको दिशानिर्देश अनुसार इच्छामृत्यु विधिलाई पछ्यायौं।
२.४ MIA इंजेक्शन र उपचार
मुसालाई शम, कन्ट्रोल, इन्डोमेथासिन र ए लाप्पा नामक ४ समूहमा अनियमित रूपमा विभाजन गरिएको थियो। २% आइसोफ्लोरेन O2 मिश्रणको साथ एनेस्थेटाइज गरिएको, मुसाहरूलाई प्रयोगात्मक OA को नेतृत्व गर्न घुँडाको जोर्नीमा 50 μL MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) को प्रयोग गरी इन्जेक्सन गरिएको थियो। उपचारहरू निम्नानुसार सञ्चालन गरिएको थियो: AIN-93G आधारभूत आहारको साथ मात्र नियन्त्रण र शैम समूहहरू राखिएको थियो। केवल, इन्डोमेथासिन समूहलाई एआईएन-९३जी आहारमा समावेश गरिएको इन्डोमेथासिन (३ मिलीग्राम/किग्रा) प्रदान गरिएको थियो र ए लप्पा ३०० मिलीग्राम/किग्रा समूहलाई ए लप्पा (३०० मिलीग्राम/किग्रा)सँग पूरक एआईएन-९३जी आहारमा तोकिएको थियो। दैनिक आधारमा 15-17 ग्राम प्रति 190-210 ग्राम शरीरको वजनको दरमा OA इन्डक्शनको दिनदेखि 24 दिनसम्म उपचार जारी राखिएको थियो।
२.५ वजन असर मापन
OA इन्डक्शन पछि, मुसाको पछिल्लो अंगहरूको तौल वहन गर्ने क्षमताको मापन incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) सँग निर्धारित तालिका अनुसार गरिएको थियो। पछिल्लो अंगहरूमा वजन वितरण गणना गरिएको थियो: वजन वहन क्षमता (%)
