ओस्टियोआर्थराइटिस (OA) ६५ वर्षभन्दा माथिका वृद्ध जनसंख्यालाई असर गर्ने दीर्घकालीन दीर्घकालीन डिजेनेरेटिभ हड्डी जोर्नी रोगहरू मध्ये एक हो [
1]। सामान्यतया, OA बिरामीहरूलाई क्षतिग्रस्त कार्टिलेज, सुन्निएको सिनोभियम, र क्षय भएको कोन्ड्रोसाइट्सको निदान गरिन्छ, जसले दुखाइ र शारीरिक पीडा निम्त्याउँछ [
2]। गठिया दुखाइ मुख्यतया जोर्नीहरूमा सूजनका कारण कार्टिलेजको क्षयको कारणले हुन्छ, र कार्टिलेज गम्भीर रूपमा क्षतिग्रस्त हुँदा हड्डीहरू एकअर्कासँग ठोक्किन सक्छन् जसले असहनीय पीडा र शारीरिक कठिनाइ निम्त्याउन सक्छ [
3]। दुखाइ, सुन्निने र जोर्नीको कठोरता जस्ता लक्षणहरूमा सूजन मध्यस्थकर्ताहरूको संलग्नता राम्रोसँग दस्तावेज गरिएको छ। OA बिरामीहरूमा, सूजन साइटोकाइनहरू, जसले कार्टिलेज र सबकोन्ड्रल हड्डीको क्षय निम्त्याउँछ, साइनोभियल फ्लुइडमा पाइन्छ [
4]। OA का बिरामीहरूलाई सामान्यतया हुने दुई प्रमुख गुनासोहरू दुखाइ र सिनोभियल सूजन हुन्। त्यसैले हालको OA उपचारको प्राथमिक लक्ष्य भनेको दुखाइ र सूजन कम गर्नु हो। [
5]। यद्यपि गैर-स्टेरोइडल र स्टेरोइडल औषधिहरू सहित उपलब्ध OA उपचारहरूले दुखाइ र सूजन कम गर्न प्रभावकारिता प्रमाणित गरेका छन्, यी औषधिहरूको दीर्घकालीन प्रयोगले हृदय, ग्यास्ट्रो-आन्द्रा र मृगौला रोग जस्ता गम्भीर स्वास्थ्य परिणामहरू निम्त्याउँछ [
6]। तसर्थ, ओस्टियोआर्थराइटिसको उपचारको लागि कम साइड इफेक्ट भएको अझ प्रभावकारी औषधि विकास गर्नुपर्छ।
प्राकृतिक स्वास्थ्य उत्पादनहरू सुरक्षित र सजिलै उपलब्ध हुने भएकाले बढ्दो रूपमा लोकप्रिय हुँदै गइरहेका छन् [
7]। परम्परागत कोरियाली औषधिहरूले गठिया सहित धेरै सूजन रोगहरू विरुद्ध प्रभावकारिता प्रमाणित गरेका छन् [
8]। अकल्याण्डिया लाप्पा डीसी यसको औषधीय गुणहरूको लागि परिचित छ, जस्तै दुखाइ कम गर्न र पेटलाई शान्त पार्न क्यूईको परिसंचरण बढाउने, र परम्परागत रूपमा प्राकृतिक एनाल्जेसिकको रूपमा प्रयोग गरिन्छ [
9]। अघिल्ला रिपोर्टहरूले सुझाव दिन्छ कि ए. लाप्पामा एन्टी-इन्फ्लेमेटरी हुन्छ [
10,
11], दुखाइ कम गर्ने [
12], क्यान्सर प्रतिरोधी [
13], र ग्यास्ट्रोप्रोटेक्टिभ [
14] प्रभावहरू। ए. लाप्पाको विभिन्न जैविक गतिविधिहरू यसको प्रमुख सक्रिय यौगिकहरूद्वारा उत्पन्न हुन्छन्: कोस्टुनोलाइड, डिहाइड्रोकोस्टस ल्याक्टोन, डाइहाइड्रोकोस्टुनोलाइड, कोस्टुसल्याक्टोन, α-कोस्टोल, सासुरिया ल्याक्टोन र कोस्टुसल्याक्टोन [
15]। पहिलेका अध्ययनहरूले दाबी गर्छन् कि कोस्टुनोलाइडले लिपोपोलिसेकेराइड (LPS) मा एन्टी-इन्फ्लेमेटरी गुणहरू देखाएको थियो, जसले NF-kB र गर्मी झट्का प्रोटीन मार्गको नियमन मार्फत म्याक्रोफेजहरूलाई प्रेरित गर्यो [
16,
17]। यद्यपि, कुनै पनि अध्ययनले OA उपचारको लागि A. lappa को सम्भावित गतिविधिहरूको अनुसन्धान गरेको छैन। हालको अनुसन्धानले (मोनोसोडियम-आयोडोएसीटेट) MIA र एसिटिक एसिड-प्रेरित मुसा मोडेलहरू प्रयोग गरेर OA विरुद्ध A. lappa को चिकित्सीय प्रभावहरूको अनुसन्धान गरेको छ।
मोनोसोडियम-आयोडोएसीटेट (MIA) जनावरहरूमा धेरैजसो पीडा व्यवहार र OA को प्याथोफिजियोलोजिकल विशेषताहरू उत्पादन गर्न प्रसिद्ध रूपमा प्रयोग गरिन्छ [
18,
19,
20]। घुँडाको जोर्नीमा इन्जेक्सन गर्दा, MIA ले कोन्ड्रोसाइट मेटाबोलिज्मलाई अवरुद्ध गर्छ र सूजन र सूजन लक्षणहरू उत्पन्न गर्छ, जस्तै कार्टिलेज र सबकोन्ड्रल हड्डीको क्षय, OA को मुख्य लक्षणहरू [
18]। एसिटिक एसिडले प्रेरित राइथिङ प्रतिक्रियालाई जनावरहरूमा परिधीय दुखाइको अनुकरणको रूपमा व्यापक रूपमा मानिन्छ जहाँ सूजन दुखाइ मात्रात्मक रूपमा मापन गर्न सकिन्छ [
19]। माउस म्याक्रोफेज सेल लाइन, RAW264.7, सूजनको लागि सेलुलर प्रतिक्रियाहरू अध्ययन गर्न लोकप्रिय रूपमा प्रयोग गरिन्छ। LPS सँग सक्रिय भएपछि, RAW264 म्याक्रोफेजहरूले सूजन मार्गहरू सक्रिय गर्छन् र TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS, र IL-6 जस्ता धेरै सूजन मध्यस्थकर्ताहरू स्राव गर्छन् [
20]। यस अध्ययनले MIA पशु मोडेल, एसिटिक एसिड-प्रेरित पशु मोडेल, र LPS-सक्रिय RAW264.7 कोशिकाहरूमा OA विरुद्ध A. lappa को एन्टी-नोसिसेप्टिभ र एन्टी-इन्फ्लेमेटरी प्रभावहरूको मूल्याङ्कन गरेको छ।
२. सामग्री र विधिहरू
२.१. बिरुवा सामग्री
प्रयोगमा प्रयोग गरिएको ए. लाप्पा डीसी. को सुकेको जरा इपुलिप फार्मास्युटिकल कम्पनी लिमिटेड, (सियोल, कोरिया) बाट खरिद गरिएको थियो। यसलाई गाचोन विश्वविद्यालयको कोरियाली औषधि कर्नल, हर्बल औषधि विज्ञान विभागका प्रो. डोङहुन लीले पहिचान गरेका थिए र भौचर नमुना नम्बर १८०६०३०१ को रूपमा जम्मा गरिएको थियो।
२.२. ए. लाप्पा एक्स्ट्र्याक्टको HPLC विश्लेषण
A. lappa लाई रिफ्लक्स उपकरण (डिस्टिल्ड वाटर, १०० डिग्री सेल्सियसमा ३ घण्टा) प्रयोग गरेर निकालिएको थियो। निकालिएको घोललाई कम-दबाव बाष्पीकरणकर्ता प्रयोग गरेर फिल्टर र कन्डेन्स गरिएको थियो। −८० डिग्री सेल्सियसमा फ्रिज-ड्राइङ पछि A. lappa एक्स्ट्र्याक्टको उत्पादन ४४.६९% थियो। A. lappa को क्रोमेटोग्राफिक विश्लेषण १२६० इन्फिनिटीⅡ HPLC-प्रणाली (Agilent, Pal Alto, CA, USA) प्रयोग गरेर जडान गरिएको HPLC संग गरिएको थियो। क्रोमेटिक पृथकीकरणको लागि, EclipseXDB C18 स्तम्भ (४.६ × २५० मिमी, ५ µm, Agilent) ३५ डिग्री सेल्सियसमा प्रयोग गरिएको थियो। नमूनाको कुल १०० मिलीग्राम ५०% मेथानोलको १० एमएलमा पातलो पारिएको थियो र १० मिनेटको लागि सोनिकेट गरिएको थियो। नमूनाहरू ०.४५ μm को सिरिन्ज फिल्टर (वाटर्स कर्पोरेशन, मिलफोर्ड, MA, USA) द्वारा फिल्टर गरिएको थियो। मोबाइल फेज संरचना ०.१% फस्फोरिक एसिड (A) र एसिटोनिट्राइल (B) थियो र स्तम्भलाई निम्नानुसार विभाजित गरिएको थियो: ०–६० मिनेट, ०%; ६०–६५ मिनेट, १००%; ६५–६७ मिनेट, १००%; ६७–७२ मिनेट, ०% विलायक B जसको प्रवाह दर १.० एमएल/मिनेट थियो। १० μL को इंजेक्शन भोल्युम प्रयोग गरेर फोहोर २१० एनएममा अवलोकन गरिएको थियो। विश्लेषण तीन प्रतिलिपिमा गरिएको थियो।
२.३. पशु आवास र व्यवस्थापन
५ हप्ता उमेरका भाले स्प्रेग-डाउली (SD) मुसाहरू र ६ हप्ता उमेरका भाले ICR मुसाहरू सामताको बायो कोरिया (ग्योन्गी-डो, कोरिया) बाट खरिद गरिएका थिए। जनावरहरूलाई स्थिर तापक्रम (२२ ± २ डिग्री सेल्सियस) र आर्द्रता (५५ ± १०%) र १२/१२ घण्टाको प्रकाश/अँध्यारो चक्र प्रयोग गरेर कोठामा राखिएको थियो। प्रयोग सुरु हुनुभन्दा एक हप्ताभन्दा बढी समयसम्म जनावरहरूलाई अवस्थासँग परिचित गराइएको थियो। जनावरहरूलाई दाना र पानीको विज्ञापन-लिबिटम आपूर्ति थियो। गाचोन विश्वविद्यालय (GIACUC-R2019003) मा जनावरको हेरचाह र ह्यान्डलिङको लागि हालको नैतिक नियमहरू सबै जनावर प्रयोगात्मक प्रक्रियाहरूमा कडाइका साथ पालना गरिएको थियो। अध्ययन अन्वेषक-अन्धा र समानान्तर परीक्षणको लागि डिजाइन गरिएको थियो। हामीले पशु प्रयोगात्मक नैतिकता समितिको दिशानिर्देश अनुसार इच्छामृत्यु विधि पालना गर्यौं।
२.४. MIA इंजेक्शन र उपचार
मुसाहरूलाई अनियमित रूपमा ४ समूहहरूमा विभाजन गरिएको थियो, अर्थात् शाम, नियन्त्रण, इन्डोमेथासिन, र ए. लाप्पा। २% आइसोफ्लोरेन O2 मिश्रणले बेहोस पारिएको हुनाले, मुसाहरूलाई प्रयोगात्मक OA निम्त्याउन घुँडाको जोर्नीमा ५० μL MIA (४० मिलीग्राम/m; सिग्मा-एल्ड्रिच, सेन्ट लुइस, MO, संयुक्त राज्य अमेरिका) को इन्ट्रा-आर्टिक्युलरली प्रयोग गरी इंजेक्शन दिइयो। उपचारहरू निम्नानुसार सञ्चालन गरिएका थिए: नियन्त्रण र शाम समूहहरूलाई AIN-93G आधारभूत आहारको साथ मात्र कायम राखिएको थियो। केवल, इन्डोमेथासिन समूहलाई AIN-93G आहारमा समावेश गरिएको इन्डोमेथासिन (३ मिलीग्राम/किग्रा) प्रदान गरिएको थियो र A. लाप्पा ३०० मिलीग्राम/किग्रा समूहलाई A. लाप्पा (३०० मिलीग्राम/किग्रा) सँग पूरक AIN-93G आहारमा तोकिएको थियो। दैनिक आधारमा १९०-२१० ग्राम शरीरको तौल प्रति १५-१७ ग्रामको दरले OA इन्डक्सनको दिनदेखि २४ दिनसम्म उपचारहरू जारी राखियो।
२.५. तौल बहाली मापन
OA इन्डक्सन पछि, मुसाको पछाडिको अंगको तौल वहन क्षमता मापन तालिका अनुसार इनक्यापेसिटीन्स-मिटरटेस्टर६०० (IITC लाइफ साइन्स, वुडल्याण्ड हिल्स, CA, USA) को साथ गरिएको थियो। पछाडिको अंगमा तौल वितरण गणना गरिएको थियो: तौल वहन क्षमता (%)।
